У лабораторній практиці при роботі з мікроорганізмами доводиться постійно вживати заходів, щоб посуд, живильні середовища, металеві інструменти, що використовуються під час роботи, не містили мікробів. Для цього застосовують такі методи стерилізації:
Стерилізацію перегрітою пароюпід тиском;
Стерилізацію текучою парою;
Стерилізацію гарячим повітрям;
Дезінфекцію.
Найкращим способом стерилізації є обробка різних об'єктівперегрітою парою в спеціальних апаратах - автоклавах.
Автоклав та стерилізація перегрітою парою під тиском
Автоклави - це металеві (сталеві, чавунні або мідні) котли з подвійними стінками та масивною кришкою, що герметично закривається за допомогою болтів і гумової прокладки. Залежно від системи обігріву автоклави бувають парові, електричні та вогневі (рис. 42). Отримання в автоклаві високого тиску та перегрітої пари температурою 115-120°С дозволяє протягом 20-30 хв знищити як вегетативні клітини, так і суперечки мікробів.
В автоклаві стерилізують всі ті предмети, які не псуються за високої температури: різні рідини (воду, живильні середовища, що не містять вуглеводних компонентів), скляний посуд, металеві інструменти, вату, марлю, папір та ін.
У тих випадках, коли деякі речовини не витримують нормального режиму стерилізації в автоклаві (зокрема поживні середовища, що містять цукру), їх стерилізують в автоклаві при температурі 112 °С протягом 20 хв, а також при більш м'яких режимах.
При високих тискахперегрітої пари в автоклаві відповідно зростає температура нагріву; це викликає карамелізацію цукрів, що додаються в деякі живильні середовища, в результаті середовища стають непридатними для визначення фізіологічних властивостейбактерій.
Вимірювання тиску всередині автоклава здійснюється за допомогою манометра, вмонтованого в кришку або корпус автоклаву. При надмірному зростанні тиску автоматично спрацьовує запобіжний клапан, розташований залежно від конструкції або на кришці або на бічній поверхні стінки автоклава. Струмінь пари, виходячи зі свистом із запобіжного клапана, попереджає про необхідність припинення нагрівання. Якщо нагрівання не припинити, автоклав може вибухнути.
У спеціальній кишеньці на кришці автоклава іноді міститься термометр, за допомогою якого вимірюється температура стерилізації. Усередині автоклава є підставка, під яку наливається вода через трубку з лійкою, розташовану зовні автоклава. Крім того, автоклави забезпечуються краном для випуску пари та повітря та краном для виливання води.
Правила поводження з автоклавом при стерилізації наступні: апарат через лійку та трубку заповнюють водою, рівень якої повинен перебувати нижче підставки. Предмети, що підлягають стерилізації, поміщають у спеціальні металеві бюкси та завантажують у автоклав. Кришку автоклава загвинчують.
Відкривши кран для виходу пари та повітря, починають нагрівання. Як тільки вода закипить, пара починає витісняти з автоклава повітря. Паровипускний кран тримають відкритим доти, доки з нього суцільним струменем не піде суха пара. Це вказує на повне видаленняповітря з автоклаву. Тоді кран зачиняють. Пара, що накопичується при подальшому нагріванні все більшому і більшій кількості, Підвищує тиск в автоклаві, а разом з тим і температуру. Під час роботи з автоклавом можна керуватися таблицею співвідношень між тиском пари та її температурою (табл. 4).
Після того, як стрілка манометра досягне потрібного показника тиску (температура в автоклаві при цьому буде відповідати прийнятій температурі стерилізації), регулюють нагрівання автоклава так, щоб тиск тримався необхідний час на одному рівні. Після закінчення стерилізації припиняють нагрівання. Коли температура в автоклаві знизиться, а стрілка манометра опуститься до нуля (тиск в автоклаві зрівняється з атмосферним), обережно відкривають кран, випускають пару і, відкривши кришку автоклава, виймають матеріал. Відкривати паровипускний кран передчасно до падіння тиску в автоклаві не можна. Різке зниження тиску камері автоклава викличе бурхливе закипання рідин, нагрітих до вищих температур, ніж 100 °З, тобто. вище за точку кипіння при нормальному атмосферному тиску. Рідкі, що бурхливо закипіли, змочуватимуть або навіть виштовхнуть ватяні пробки з судин - роботу буде зроблено марно. Поживні середовища псуватимуться, оскільки на мокрих пробках легко розвивається мікрофлора, що потрапляє з повітря, проникає всередину і заражає середовища. Крім того, відкривати автоклав із підвищеним тиском небезпечно для працівника.
Однак як тільки стрілка манометра зупиниться на нулі, автоклав потрібно відкрити відразу ж, інакше конденсат почне стікати на пробки і викличе їх змочування. Щоб уникнути змочування пробок конденсаційною водою, перед стерилізацією їх закривають папером.
Матеріали, поміщені в автоклав, будуть надійно простерилізовані за 20-30 хв, якщо температура підтримується 120°С, що відповідає тиску 2 ат (19,61 * 10000 н/м2) або за манометром 1 ат понад нормальною. Автоклав можна з успіхом застосовувати і для стерилізації середовищ текучою парою; у цьому випадку кришку автоклава не загвинчують.
Кип'ятильник Коха та стерилізація текучою парою
Кип'ятильник Коха є циліндром з оцинкованої жерсті або міді з подвійними стінками і конічною кришкою у вигляді шолома (рис. 43). У кришці посередині є отвір термометра. Зовні кип'ятильник Коха покривають шаром теплоізолюючого матеріалу: азбесту, лінолеуму та ін.
Усередині кип'ятильника вміщена перегородка (підстава), що розділяє внутрішній простіркип'ятильника на дві секції: верхню та нижню. Нижня секція заповнюється водою, рівень якої встановлюється за водомірним склом: вода не повинна покривати верхню частину підстави. У верхню секцію кип'ятильника в гратчастих відерцях, що встановлюються одне на інше, поміщають предмети, що стерилізуються. Закривши кип'ятильник кришкою, починають нагрівати у ньому воду. Початком стерилізації є момент, коли термометр покаже 98-100°С. За відсутності термометра початком стерилізації вважається момент, коли з отвору в кришці окропу почне енергійно виходити пара. Таким чином, предмети, що стерилізуються під час роботи кип'ятильника будуть весь час знаходитися в струмені текучої пари.
Метод стерилізації текучим паром завдяки його простоті та доступності широко поширений у лабораторній практиці. Поточною парою стерилізують головним чином живильні середовища, у яких змінюються властивості при нагріванні їх вище 100°С: білкові, вуглеводні та желатинові. Для цих середовищ метод стерилізації текучим паром найбільш прийнятний.
Недоліком методу стерилізації плинною парою є його тривалість, так як для повної стерилізації середовища необхідно проводити багаторазове нагрівання в кип'ятильнику протягом певного часу - від 20 хв до 1,5 год (в середньому 30-45 хв) в залежності від об'єму рідини з проміжками в 24 год. Проміжок часу між нагріваннями середовища рекомендується витримувати в термостаті при 25-30 °С.
Одноразове нагрівання в окропі Коха викликає загибель лише вегетативних мікробних клітин, але суперечки при цьому можуть зберегтися. При витримуванні стерилізованого живильного середовища у сприятливих умовах (при кімнатній температурі, а ще краще в термостаті) частина суперечок, що залишилися, проросте і до наступного дняперетвориться на вегетативні клітини. Повторне нагрівання викликає загибель і цих клітин, що знову розвинулися. Нарешті, третє нагрівання через добу витримування середовища термостаті забезпечить повну стерильність. Такий метод отримав назву дробової стерилізації. У практичної роботизамість стерилізації текучою парою в кип'ятильнику Коха часто застосовують звичайну стерилізацію в автоклавах при 112 ° С з протитиском 0,5 ат протягом 15-20 хв.
Сушильна шафа та стерилізація гарячим повітрям
У лабораторній практиці для стерилізації мікробіологічного посуду необхідно мати сушильну шафу або так звану піч Пастера. Принцип влаштування сушильної шафи та печі Пастера однаковий. Печі робляться тільки прямокутної форми, а сушильні шафи можуть мати не тільки прямокутну, а й циліндричну форму (рис. 44 та 45). У цих апаратах стерилізація здійснюється гарячим повітрям (сухим жаром) при температурі 160 ° С протягом 1 години або при температурі 150 ° С протягом 2 год.
Як печі Пастера, так і сушильні шафи - це порожнисті всередині апарати з подвійними стінками, з подвійними дверцятами, що щільно прикриваються. Зовні для термоізоляції вони покриваються шаром азбесту. Між стінами циркулює гаряче повітря, нагрівання якого здійснюється електричними спіралями, або газовими пальниками. Усередині шафи є кілька (зазвичай дві чи три) дірчастих поличок. У верхній частині шафи є два отвори: один призначений для термометра, а другий служить для вентиляції. Найбільш зручні електричні сушильні шафи.
У сушильних шафах останньої конструкції передбачені чотири ступені обігріву, які можуть бути включені в дію спеціальним регулятором, що розміщується на бічній стінці шафи. Потрібний ступінь обігріву досягається включенням однієї, двох, трьох або всіх чотирьох електричних спіралей, причому послідовність включення спіралей може бути будь-якою.
У сушильних шафах можна, крім скляного посуду, стерилізувати марлю, вату, хоча все ж таки краще обробляти їх в автоклаві, так як при температурі 160 ° С вони жовтіють. Не можна стерилізувати в сушильній шафі гумові вироби, оскільки вони не виносять. високої температури- стають ламкими і псуються. Рідини за 150-160 °С закипають і змінюють свій хімічний склад.
Щоб уникнути подальшого зараження простерилізованих предметів мікробами з повітря, перед стерилізацією їх загортають у папір. Чашки Петрі загортаються в папір по 2 штуки таким чином, щоб в обгортці не було щілин. Скляні трубки та піпетки також загортають у папір, спочатку кожний окремо, а потім у пачки по 10-20 штук. Загортання трубок і піпеток має бути виключно акуратним, що повністю оберігає їхню зовнішню поверхню від сполучення з повітрям. Колби, пробірки, пляшки перед стерилізацією гарячим повітрям закривають ватяними пробками та паперовими ковпачками.
Не можна допускати в сушильній шафі підвищення температури вище 170 °С, тому що при такій температурі ватяні пробки буріють, а паперові обгортки стають ламкими і навіть обвуглюються. Початком стерилізації є момент, коли термометр покаже 150-160 °С. Після необхідного для стерилізації часу нагрівання припиняють. Щоб запобігти розтріскуванню посуду, стерилізувати потрібно тільки сухий посуд і шафу відкривати після стерилізації лише тоді, коли температура в ньому впаде до 50-70 °С. Дрібні лабораторні предмети, наприклад, платинові петлі, голки, пінцети, ножиці тощо, можна стерилізувати простим прожарюванням на полум'ї газового пальника (або спиртування).
Дезінфекція
До дезінфекції у мікробіологічній лабораторії доводиться вдаватися дуже часто. Найбільш уживані дезінфікуючі речовини такі: 3-5%-ний розчин карболової кислоти та розчини інших вищих фенолів, 50-70%-ний розчин етилового спирту, такої ж концентрації бутиловий спирт, 4%-ний розчин формаліну, 1-2%-ні розчини хлороформу та толуолу, 0,5%-ний розчин хлораміну та ін.
У мікробіологічних лабораторіях консервних заводів дезінфікують поверхні столів, посуд, підлогу, стіни приміщень. Для дезінфекції поверхні столів можна використовувати як розчини етилового спирту, а й розчини карболової кислоти.
Дезінфекція каналізаційних пристроїв на консервних заводах та інших харчових підприємствах проводиться 5-10%-ним розчином хлорного вапна. Для знезараження оборотної скляної тари на консервних заводах застосовують хлорну воду, що містить 1 л щонайменше 100 мг активного хлору. Для приготування такого розчину беруть хлорне вапно, змішують його з невеликою кількістю води до отримання густої маси. молочного кольору. Цю суміш додають до води, ретельно розмішують та залишають на добу. Хлорне вапнореагує з утворенням гідрату окису кальцію - Ca(OH)2 - та активного хлору. Ca(OH)2 осідає на дно, розчин над осадом після освітлення виходить прозорим, зеленого кольору. Замочування тари у такому розчині триває 10 хв. Після хлорування тара має бути ретельно промита у проточній воді.
Стерилізація
Стерилізація - це знешкодження, тобто повне звільнення об'єктів навколишнього середовищавід мікроорганізмів та їх суперечка.
Стерилізацію виробляють різними способами:
1) фізичними (вплив високої температури, УФ-променів, використання бактеріальних фільтрів);
2) хімічними (використання різних дезінфектантів, антисептиків);
3) біологічним (застосування антибіотиків).
У лабораторній практиці зазвичай застосовують фізичні способистерилізації.
Можливість та доцільність використання того чи іншого способу стерилізації обумовлена особливостями матеріалу, що підлягає стерилізації, його фізичними та хімічними властивостями.
Фізичні методи
Прожарювання в полум'ї пальника або фламбування - спосіб стерилізації, при якому відбувається повне знешкодження об'єкта, оскільки гинуть і вегетативні клітини, і суперечки мікроорганізмів. Зазвичай прожарюють бактеріологічні петлі, шпателі, піпетки, предметні та покривні шибки, дрібні інструменти. Не слід стерилізувати прожарюванням ножиці, скальпелі, тому що під дією вогню ріжуча поверхня стає тупою.
Стерилізацію сухим жаром або гарячим повітрям здійснюють у печах Пастера (сушильних сухожарових шафах). Пекти Пастера — шафа з подвійними стінками, виготовлена з термостійких матеріалів — металу та азбесту. Нагрівають шафу за допомогою газових пальниківабо електронагрівальних приладів. Шафи з електричним нагріваннямзабезпечені регуляторами, що забезпечують необхідну температуру. Для контролю температури є термометр, вставлений в отвір верхньої стінки шафи.
Рідини (живильні середовища, ізотонічний розчин хлориду натрію та ін.), предмети з гуми та синтетичних матеріалів стерилізувати сухим жаром не можна, оскільки рідини закипають і виливаються, а гума та синтетичні матеріалиплавляться.
Стерилізація кип'ятінням
Кип'ятіння - спосіб стерилізації, що гарантує знешкодження за умови відсутності в матеріалі, що стерилізується, суперечка. Застосовують для обробки шприців інструментів, скляної та металевого посудугумових трубок і т. п. Стерилізацію парою під тиском виробляють в автоклаві. Цей спосіб стерилізації заснований на дії на стерилізовані матеріали насиченої водяної пари при тиску вище атмосферного. Внаслідок такої стерилізації при одноразовій обробці гинуть як вегетативні, так і спорові форми мікроорганізмів. Автоклав (рис. 12) — масивний котел, зовні покритий металевим кожухом, герметично закритий кришкою, яка щільно пригвинчується до котла болтами, що відкидаються.
Температура та тривалість автоклавування живильних середовищ визначається їх складом, зазначеним у рецепті приготування живильного середовища. Наприклад, прості середовища (м'ясопептонний агар, м'ясопептонний бульйон) стерилізують 20 хв при 120 ° С (1 атм). Однак при цій температурі не можна стерилізувати середовища, що містять нативні білки, вуглеводи та інші речовини, що легко змінюються від нагрівання. Середовища з вуглеводами стерилізують дробово при 100 ° С або в автоклаві при 112 ° С (0,5 атм) 10-15 хв. Різні рідини, прилади, що мають гумові шланги, пробки, бактеріальні свічки та фільтри стерилізують 20 хв при 120 ° С (1 атм).
Стерилізацію текучою парою роблять в апараті Коха. Цей спосіб застосовують у тих випадках, коли стерилізований об'єкт змінюється при температурі вище 100° С. Текучою парою стерилізують живильні середовища, що містять сечовину, вуглеводи, молоко, картопля, желатин та ін.
Апарат (кип'ятильник) Коха являє собою металевий циліндр, обшитий зовні (для зменшення тепловіддачі) повстю або азбестом. Циліндр закривають конічною кришкою з отвором для виходу пари. Усередині циліндра знаходиться підставка, рівня якої наливають воду. На підставку ставлять відро з отвором, в яке поміщають матеріал, що стерилізується. Нагрівають апарат Коха за допомогою газу чи електрики. Відлік часу стерилізації ведуть з моменту енергійного виділення пари у країв кришки та з отвору для виходу пари. Стерилізують протягом 30-60 хв. Після закінчення стерилізації нагрівання припиняють. Виймають із апарата відро з матеріалом і залишають при кімнатній температурі до наступного дня. Прогрівання проводять 3 дні поспіль при температурі 100 ° С по 30-60 хв. Такий метод називається дробової стерилізації. При першому прогріванні гинуть вегетативні форми бактерій, а спорові зберігаються. За добу суперечки встигають прорости та перетворитися на вегетативні форми, які гинуть на другий день стерилізації. Так як можливо, що деяка частина суперечка не встигла прорости, матеріал витримують ще 24 години, а потім проводять третю стерилізацію. Стерилізація парою в апараті Коха не вимагає спеціального контролю, оскільки показником правильної роботи приладу служить стерильність приготовлених поживних середовищ. Стерилізувати текучим паром можна також в автоклаві при незакрученій кришці та відкритому випускному крані.
Стерилізація ультрафіолетовим опроміненням
Стерилізацію УФ-променями виробляють за допомогою спеціальних установок. бактерицидних ламп. УФ-промені мають високу антимікробну активність і можуть викликати загибель не тільки вегетативних клітин, але і суперечка. УФ-опромінення застосовують для стерилізації повітря в лікарнях, операційних, дитячих закладах і т.д. У мікробіологічній лабораторії УФ-променями обробляють бокс перед роботою.
Хімічні методи
Цей вид стерилізації застосовують обмежено, і він служить в основному для попередження бактеріального забруднення поживних середовищ та імунобіологічних препаратів (вакцин та сироваток).
До живильних середовищ найчастіше додають такі речовини, як хлороформ, толуол, ефір. При необхідності звільнити середовище від цих консервантів її нагрівають на водяній бані при 56 ° С (консерванти випаровуються).
Для консервування вакцин, сироваток користуються мертіолатом, борною кислотою, формаліном і т.д.
Біологічна стерилізація
Біологічна стерилізація ґрунтується на застосуванні антибіотиків. Цей метод використовують для культивування вірусів.
Б. Детальна технологія виготовлення сироватки великої рогатої худоби на бойнах м. Ліона
Вже здійснили забір крові у 1000 тварин, сироватку розлили у пляшки та безкоштовно роздали майже 20000 дітей.
Таким чином показано, що промислове виготовленнясироватки на бойні з дотриманням правил асептики та санітарних розпоряджень можливо.
Серотерапевтичне підприємство не дає додаткових гарантій — воно не має права виробляти розтин тварини-донора.
Технологія, що застосовується у нашому виробництві, може здатися менш суворою з точки зору асептики, ніж класичний метод. Але в неї велика перевагау швидкості, оскільки сироватка повністю виготовляється у день забору крові.
Якщо нинішні обставини спонукали нас виробляти сироватку на бійні, зрозуміло, що це тимчасовий захід, оскільки гематоген та лікувальні сироватки можуть бути виготовлені лише за умов спеціалізованого інституту.
Відбір тварин. У Ліоні доктор Гьє, головний ветеринар бійні, і доктор Фонтенай, ветеринар-інспектор, самі відбирають донорів серед худоби, призначеної для забезпечення м'ясом нашого міста. Відібраній тварині ставлять тавро на правому плечі, щоб полегшити подальший контроль.
Після вибою ретельно перевіряються органи тварин. Відомо, що розтин є найвірнішим методом виявлення туберкульозу.
Наступні операції покажуть, що сироватка хворої тварини ніколи не споживалася.
Забір крові у тварин. У приміщенні для забору крові бик-донор надійно утримується автоматичним ярмом.
Ветеринар дезінфікує шкіру йодом на рівні шиї тварини та робить скальпелем надріз у ділянці яремної вени. Венозна пункція виробляється троакаром, стерилізованим тривалим кип'ятінням. Як тільки з'являється кров, до троакара приєднується стерилізований в автоклаві гумовий шланг, щоб пов'язати його безпосередньо та асептично з дефібринатором.
Нижче описано технологію дефібринування та спосіб стерилізації дефібринатора.
Від кожної тварини отримують 8-10 літрів крові, яку зважують на терезах, що знаходяться під апаратом.
Способи стерилізації
Для полегшення операції санітарного контролю кожному дефібринаторі є ярлик з даними тваринного-донора.
Слід зазначити, що забір крові проводиться асептично завдяки замкнутому ланцюгу. складових частин: троакар, гумовий шланг та дефібринатор, які попередньо стерилізуються.
Ярлик з датою забору крові супроводжує отриману кров з моменту венозної пункції до її перетворення на сироватку та зберігання в холодильниках.
Дефібринування крові. У більшості серотерапевтичних закладів кров, розлита у скляні судини, відокремлює сироватку під тиском вантажу. У умовах кров, вперше отримана від великої рогатої худоби, містить мало сироватки (приблизно 10%).
Тому серотерапевтичний центр у Ліоні використовує спеціальну технологію, що дає 50% сироватки, і до того ж у короткий термін.
Доктор Мерье зміг розробити цей метод частково після висновків, зроблених ним у Королівському інституті у Роттердамі та у Серотерапевтичному інституті у Мілані.
Як тільки в цих інститутах одержують кров, її дефібринують у стерильних апаратах, що нагадують олійниці.
Протягом 5 хвилин кров збивається в посудині, захищеній від повітря. Треба точно дотримуватись часу дефібринування: при його нестачі може статися згортання, а при надлишку - гемоліз (через розрив еритроцитів). Треба користуватися лабораторним годинником, що дозволяє відзначити точно 15 хвилин дефібринування.
У верхній частині рис. 4 видно, що кількість заборів крові досягла 1000, що записується на емблемі Центру.
Центрифугування.
Відразу після дефібринування апарати переносяться до лабораторії, що знаходиться за кілька метрів від приміщення для забору крові. Вміст кожного дефібринатора обробляється окремо, щоб можна було вилучити сироватку тварини, яка виявилася хворою.
Незгортається після дефібринування кров пропускається через сепаратор Альфа-Лаваль (молочний сепаратор, пристосований нами для виготовлення сироватки).
Під дією відцентрової сили кров ділиться на рівні частини: червона містить червоні кульки, а прозора складає сироватку (фібрин залишається на лопатях дефібринатора).
Від однієї тварини одержують 8-10 літрів крові або приблизно 4-5 літрів сироватки, яку зливають у флакон Пірексу, простерилізований при 180°С.
До флакона додається ярлик дефібринатора і під тим самим номером заповнюється картка для забезпечення санітарного контролю.
У сироватку додають спеціальний антисептик, розрахований так, щоб він був досить активним, не порушуючи прозорості та смаку сироватки. На 1 літр сироватки додають також 100 мл розчину, що містить 1:1000 формаліну та 1:5000 сюнуксолу.
(Між приготуваннями центрифуга ретельно дезінфікується антисептиком.)
У принципі, червону фракцію крові слід було б повертати м'ясникам для виготовлення кров'яної ковбаси, але найчастіше вона залишається невикористаною, тому з неї можна готувати сироп за нижчеописаною технологією.
Особливі випадки приготування сиропу з крові. Сироп відрізняється двома перевагами: дає можливість використовувати червону частину крові, що залишається після отримання сироватки, і має приємним смаком, що подобається дітям.
Через брак гліцерину важко приготувати сироп для тривалого зберігання, але можна зробити дуже активний продукт на воді та давати його дітям по 2-3 столові ложки на день. До червоної частини крові додають 20%. питної водиі зберігають сироп у льодовиках, доки здійснюється санітарний контроль.
Потім додають рівну частину 100-відсоткового цукрового сиропу(цукор можна отримати за картками колективів, яким сироп призначений).
У сироп додають лимонний або апельсиновий екстракт, щоб нейтралізувати смак крові, та розливають у пляшки по 250 мл.
Тіндалізація сироватки.
Відразу після центрифугування, тобто через годину після забору крові, сироватку типдалізують при температурі 56°С протягом години.
Для цього її опускають у водяну баню з температурою, що автоматично підтримується. Тіндалізація за такої температури (при вищій сироватка згортається) необхідна для часткової стерилізації сироватки, хоча швидкість її приготування як така є гарантією асептики.
Слід зазначити, що кожна п'ятилітрова судина має початковий ярлик дефібринатора, таким чином, нумерація сироватки відповідає нумерації тварин-донорів.
Контрольна картотека. Картка дозволяє в будь-який час перевірити походження тварини-донора, етапи приготування сироватки, дату розливу, а також розподіл сироватки.
Санітарний контроль. Поки судини складовані в холодильне камері, ветеринари-інспектори займаються санітарним контролем тварин-донорів Після їх вибою проводиться ретельне розтин, що дозволяє виявити найменші симптоми туберкульозу.
У разі виявлення хвороби можна легко вилучити відповідну сироватку. Відомо, що кров кожної тварини переробляється окремо і сироватка міститься в окремих пронумерованих флаконах.
Серотерапевтичний центр Громадського комітету гігієни дитинства на Ліонських бійнях
Контрольний номер …
Бича сироватка в літрах
Картка та ярлик
Наведена вище картка та ярлик запобігають будь-якій плутанині.
У Ліоні санітарні заходи особливо суворі, оскільки один і ті ж ветеринари відбирають тварин, проводять забір крові та перевіряють м'ясо.
Стерилізація обладнання. Тварини сироватки є чудовим середовищем для розмноження мікробів, і їх можна стерилізувати лише частково. При температурі вище 56° вони згортаються та каламутніють, якщо додати сильний антисептик. Тому при всіх операціях виготовлення сироватки потрібна максимальна стерильність, обладнання перед вживанням має бути забезпечене.
Індивідуальні дефібринатори стерилізуються таким чином: на ніч, що передує забору крові, їх заповнюють антисептичним розчином, а за кілька годин до забору крові звільняють від антисептика за допомогою крана, що знаходиться в нижній масті апарату. Центрифуги, застосовувані виготовлення сироватки, також обробляють антисептиком, зокрема між переробкою вмісту кожного дефібринатора.
В електропечі при температурі 180 ° С стерилізується вся скляний посудвключаючи п'ятилітрові судини для зберігання сироватки.
Флакони ємністю 250 мл для сироватки також стерилізуються при температурі 180°С. Для спрощення операції посуд знаходиться в ящиках, які використовуються при розливі та роздачі населенню.
доставка квітів у воскресенськ
Стерилізація представлена фізичним, хімічним, механічним та біологічним методами та різними способами.
Доцільність застосування того чи іншого методу стерилізації та його способів залежить від особливості матеріалу, що підлягає стерилізації, його фізичних та хімічних властивостей.
Тривалість стерилізації залежить від стерилізованого об'єкта, стерилізуючого агента та його дози, температури та вологості навколишнього середовища.
Фізичний метод стерилізації
До способів фізичного методустерилізації відносяться висушування, спалювання та прожарювання, кип'ятіння, пастеризація та тиндалізація, гаряче повітря (сухий жар), ультразвук, ультрафіолетове та радіоактивне випромінювання, струм високої частоти, сонячне світло.
Найбільш поширеним способом стерилізації предметів, що допускають застосування високої температури, є стерилізація вогнем, гарячим повітрям та насиченою водяною парою під тиском.
Вогонь використовують для спалювання інфікованих предметів, які не становлять будь-якої цінності (непотрібні папери, старі шпалери, ганчірки, сміття), для знезараження мокротиння хворих на туберкульоз, трупів людей і тварин, які загинули від особливо небезпечних інфекцій, а також для випалювання та прожарювання різних предметів .
Випалювання та прожарювання широко застосовується в мікробіологічній практиці для знезараження інструментів, лабораторного та аптечного посуду.
Прожарювання в полум'ї пальника або фламбування - спосіб стерилізації, при якому відбувається повне знешкодження об'єкта, оскільки гинуть і вегетативні клітини, цисти та суперечки мікроорганізмів.
Зазвичай прожарюванням стерилізують петлі, шпателі, піпетки, предметні та покривні скла, дрібні інструменти та інші заражені предмети, якщо їх не можна кип'ятити. Не рекомендується стерилізувати прожарюванням ножиці та скальпелі, тому що під впливом вогню ріжуча поверхня стає тупою.
Одним з найбільш простих і поширених способів фізичного методу стерилізації, що застосовуються в медичної практикиє стерилізація гарячим повітрям (сухим жаром). Сухожарова стерилізація здійснюється у сушильних шафах (печах Пастера). Сухе гаряче повітря має бактерицидну, вірусоцідну, спороцидну дію і використовується в основному для стерилізації виробів зі скла (лабораторний посуд-кухлі Петрі, колби, піпетки, пробірки та ін.), а також виробів з металу, які можуть бути простерилізовані парою під тиском.
Крім того, сухий жар використовується для стерилізації предметів з порцеляни та термостійких речовин (тальк, біла глина), а також мінеральних та рослинних олій, жирів, вазеліну, ланоліну, воску. Найбільш ефективним режимом для цього способу стерилізації, що забезпечує загибель вегетативних форм та суперечка, є температура 160 – 180 градусів протягом 15 хвилин.
Не можна стерилізувати сухим жаром живильні серед, ізотонічний розчин, предмети з гуми та синтетичних матеріалів, оскільки рідини закипають та виливаються, а гума та синтетичні матеріали плавляться.
Стерилізація насиченою парою під тиском – це найбільш надійний і найчастіше приміряний спосіб стерилізації перев'язувального матеріалу, води, деяких лікарських засобів, поживних середовищ, м'якого інвентарю, інструментів, а також для знезараження відпрацьованого зараженого матеріалу.
У хірургічній практиці перев'язувальний матеріал, халати хірургів, білизну для оперованого знезаражують за допомогою пари в автоклавах. Стерилізація парою під тиском здійснюється у спеціальних апаратах – автоклавах.
При автоклавуванні відбувається повне знищення всіх мікроорганізмів та суперечка. Метод стерилізації парою під тиском заснований на нагріванні матеріалу насиченою водяною парою під тиском вище атмосферного. Спільна дія високої температури та пари забезпечують особливу ефективність даного способу. У цьому гинуть і вегетативні клітини, і суперечки мікроорганізмів.
Суперечки мікробів під впливом насиченої водяної пари гинуть протягом 10 хвилин, а вегетативні форми - від 1 до 4 хвилин.
Висока бактерицидна сила насиченої париобумовлена тим, що під впливом водяної пари під тиском білки мікробної клітини набухають і згортаються, внаслідок чого мікробні клітини гинуть.
Бактерицидна дія насиченої водяної пари посилюється при надмірному тиску.
Стерилізацію в автоклаві проводять за різних режимів.
Так, прості живильні середовища (м'ясо – пептонний агар та м'ясо – пептонний бульйон) стерилізують 20 хвилин при 120 градусах (1 атм.). Але при цьому режимі не можна стерилізувати середовища, що містять білки, вуглеводи та інші речовини, що легко змінюються від нагрівання.
Середовища з вуглеводами стерилізують в автоклаві за 0,5 атм. 10 – 15 хвилин або дробово текучим паром.
За допомогою високої температури можна знищити найстійкіші форми патогенних мікроорганізмів (включаючи і спороутворюючі) не тільки на поверхні об'єктів, що знезаражуються, але і глибині їх.
У цьому полягає велика перевага високої температури, як надійного засобу стерилізації. Однак, деякі предмети псуються під дією високої температури і в цих випадках доводиться вдаватися до інших способів та засобів знезараження.
Повне знешкодження матеріалів і предметів, що не допускають застосування стерилізації високою температурою, досягається шляхом повторної стерилізації водяною парою в апараті Коха при температурі не вище 100 градусів. Цей спосіб називається дробової стерилізації. Він зводиться до того, що спорові форми мікробів, що залишаються неубитими, через добу в термостаті при 37 градусах проростають у вегетативні клітини, загибель яких настає при подальшій стерилізації даного об'єкта текучим паром.
Обробку парою проводять три рази по 30 - 40 хвилин. Одноразове прогрівання матеріалу при температурі нижче 100 градусів відоме під назвою пастеризації. Пастеризація запропонована Пастером і призначена переважно знищення переважно безспорових мікроорганізмів. Пастеризацію проводять при 60-70 градусах від 15 до 30 хвилин, при 80 градусах від 10 до 15 хвилин.
У мікробіологічній практиці пастеризацією посівного матеріалу часто користуються виділення чистих культур спорообразующих мікроорганізмів і виявлення здатності мікроорганізмів до освіти спор.
Для рідин, що втрачають смакові та інші цінні якості при дії високої температури (молоко, ягідні та фруктові соки, пиво, живильні середовища, що містять вуглеводи або сечовину та ін) стерилізацію текучим паром проводять при 50 – 60 градусах протягом 15 – 33333330 хвилин при 70-80 градусах протягом 5-10 хвилин. При цьому гинуть мікроби середньої резистентності, а стійкіші та суперечки зберігаються.
Дробна 5 - 6 кратна стерилізація при 60 градусах протягом 1 години зветься тиндалізації.
Багато виробів медичного призначення, виготовлені з полімерних матеріалів, не витримують стерилізації паровим способомза загальноприйнятими режимами. Для багатьох виробів через особливості, що містяться в них рідин (консервант, лікарські та інші засоби) неможливо стерилізувати загальноприйнятими способами і методами. Для таких виробів розробляються індивідуальні режими стерилізації, що забезпечують надійне забезпечення об'єктів.
Так, стерилізація ротора для поділу крові на фракції проводиться водяною парою при температурі 120 градусів протягом 45 хвилин.
Стерильність контейнерів для консервантів досягається за 110 градусів протягом 60 хвилин.
Кип'ятіння – спосіб стерилізації, що застосовується для забезпечування шприців багаторазового користування, хірургічних інструментів, гумових трубок, скляний та металевий посуд.
Стерилізацію кип'ятінням проводять у стерилізаторах. Спорові форми в окропі гинуть через 20 - 30 хвилин. Кип'ятіння протягом 45 хвилин широко використовують для знезараження виділень та інших інфекційних матеріалів, білизни, посуду, іграшок, предметів догляду за хворими.
Гарячу воду (60 – 100 градусів) з миючими засобамивикористовують при пранні та прибиранні для механічного видалення забруднень та мікроорганізмів.
Більшість вегетативних клітин гинуть за 70 градусів через 30 хвилин.
Стерилізація фільтруванням застосовується в тих випадках, коли субстрати не витримують нагрівання, зокрема для середовищ, що містять білки, для сироваток, деяких антибіотиків, вітамінів, летких речовин. Цей прийом досить широко застосовується для стерилізації культуральної рідини, коли необхідно звільнити її від клітин мікроорганізмів, але зберегти всі продукти обміну, що містяться в ній, в незміненому вигляді.
Спосіб полягає у фільтруванні рідин через спеціальні фільтри, що мають дрібнопористі перегородки і тому затримують клітини мікроорганізмів.
Найбільш широко використовуються два типи фільтрів: мембранні фільтри та фільтри Зейтца.
Мембранні фільтри готують із колодію, ацетату, целюлози та інших матеріалів.
Фільтри Зейтца виготовлені із суміші азбесту з целюлозою.
Крім того, для стерилізації застосовуються фільтри, виготовлені з каоліну з домішкою кварцового піску, з інфузорної землі та інших матеріалів («свічки» Шамберлана, Беркфельда).
Мембранні та азбестові фільтри розраховані на одноразове використання.
При ультрафіолетовому опроміненні бактерицидний ефект забезпечують промені завдовжки 200 – 450 нм, джерелом яких є бактерицидні лампи.
За допомогою бактерицидних ламп виробляють стерилізацію ультрафіолетовими променямиповітря у лікувально – профілактичних установах, боксах мікробіологічних лабораторій, на підприємствах харчової промисловості, у боксах з виробництва вакцин та сироваток, в операційних, маніпуляційних, дитячих закладах та ін.
Ультрафіолетові промені мають високу антимікробну активність і можуть викликати загибель не тільки вегетативних клітин, але і їх суперечка.
Сонячне світло викликає загибель мікроорганізмів внаслідок дії ультрафіолетового опромінення та висушування.
Висушування за допомогою сонячного світлазгубно діє на багато видів мікроорганізмів, але дія його поверхнева і тому в стерилізаційній практиці сонячне світло відіграє допоміжну роль.
У останнім часомпри лікуванні ран та опіків використовують у вигляді гелів покриття із синтетичних та природних полімерів.
Для місцевого лікування ран та опіків широко застосовують полімерні антисептичні плівки. До їх складу входять такі антимікробні засоби широкого спектру дії, як катапол, діоксидин, синій йод, а також сорбіт, що містить глутаровий альдегід. Для стерилізації цих плівок застосовується іонізуюче випромінювання у дозі 20,0 кГр. При промисловому випуску полімерних антисептичних плівок та сорбенту стерильність їх за такого режиму стерилізації забезпечується повністю.
Радіоактивне випромінювання вбиває всі види мікроорганізмів як у вегетативної, і у спорової формі. Воно широко застосовується для стерилізації на підприємствах, що випускають стерильну продукцію та стерильні вироби медичного призначення одноразового користування, для дезінфекції. стічних водта сировини тваринного походження.
Механічний методстерилізації
Механічні способи стерилізації дозволяють видалити мікроби з поверхні предметів. До них відносяться обмивання, витрушування, підмітання, вологе протирання, провітрювання, вентиляція, обробка пилососом, прання.
Хімічний методстерилізації
У медичній практиці нині дедалі більше широке застосуваннязнаходять пластмаси.
Вони використовують у стоматології, в щелепно – лицьової хірургії, в травматології, ортопедії, хірургії. Більшість пластмас не витримують теплових способів стерилізації парою під тиском та сухим жаром (сухим нагрітим повітрям). Застосовувані для стерилізації таких об'єктів розчини спирту, діоциду, потрійного розчину не забезпечують стерильності виробів, що обробляються.
Тому для стерилізації виробів із пластмас використовують газовий та радіаційний методи, а також розчини хімічних препаратів.
Впровадження у практику лікувальних закладів великої кількостівиробів з термолабільних матеріалів сприяє впровадженню радіаційного, газового способівзнезараження та стерилізації розчинами дезінфікуючих засобів.
При хімічній стерилізації використовують гази та засоби з різних хімічних груп (перекисні, фенольні, галоїдовмісні, альдегіди, луги та кислоти, поверхнево – активні речовинита ін). Для використання в побуті випускаються миючі, чистячі, відбілюючі та інші препарати, що мають антимікробну дію за рахунок введення. хімічних речовин.
Ці препарати використовуються для очищення та знезараження санітарно-технічного обладнання, посуду, білизни та ін.
Пара формальдегіду (пароформ) може застосовуватися в лікувальних закладах для стерилізації. металевих виробівмедичного призначення (скальпелі, голки, пінцети, зонди, затискачі, гачки, кусачки та ін.).
Перед стерилізацією парами формальдегіду виробу необхідно піддати передстерилізаційному очищенню та ретельно просушити.
При стерилізації будь-яким хімічним способом регламент обробки того чи іншого об'єкта залежить від особливостей знезаражуваного об'єкта, резистентності мікробів, особливостей властивостей хімічного препарату, температури навколишнього середовища, вологості та інших факторів.
Так, стерильність металевих інструментівдосягається за п'ять годин витримування в герметичній камері з парофомом при температурі не нижче 20 градусів та відносної вологості 95 - 98%, при температурі 15 градусів повна стерильність цих об'єктів досягається лише через 16 годин.
Спороцидна активність глутарового альдегіду залежить від температури. Оптимум його настає при температурі 15 – 25 градусів. При підвищенні температури активність спороцидної дії препарату знижується.
Стерилізацію хімічним методом застосовують дещо обмежено. Найчастіше цей метод використовують для попередження бактеріального забруднення поживних середовищ та імунобіологічних препаратів (вакцин та сироваток). До живильних середовищ найчастіше додають такі речовини, як хлороформ, толуол, ефір. При необхідності звільнити середовище від цих консервантів її нагрівають на водяній бані за 56 градусів і консерванти випаровуються.
Для консервації вакцин або сироваток використовують мертіолат, борну кислоту, формалін.
Біологічний методстерилізації
Біологічна стерилізація ґрунтується на застосуванні антибіотиків.
Цей метод широко використовується для культивування вірусів.
Стерилізація (від латів. sterilis - безплідний) передбачає повну інактивацію мікробів на предметах, що піддаються обробці.
Пекти Пастера — стерилізація сухим жаром.
Існують три основні методи стерилізації: теплова, променева, хімічна.
Йод.
Теплова стерилізація ґрунтується на чутливості мікробів до високої температури.
При 60 ° С та наявності води відбувається денатурація білків, у тому числі ферментів, внаслідок чого вегетативні форми бактерій гинуть. Суперечки, що містять дуже невелика кількістьводи у зв'язаному стані та володіють щільними оболонками, інактивуються при 160-170 °С. Для теплової стерилізації застосовують переважно сухий жар і пар під тиском.
Стерилізацію сухим жаром роблять у сухожарових шафах, або печах Пастера. Пекти Пастера являє собою металеву шафу, що щільно закривається, нагрівається за допомогою електрики і з термометром.
Знезараження матеріалу в ньому відбувається при 160-170 ° С протягом 60-120 хв. Недоліком цього методу є те, що таку високу температуру витримують тільки деякі предмети, що стерилізуються, наприклад лабораторне скло.
Найбільш універсальним методом стерилізації є обробка парою під тиском в автоклавах, в яких стерилізують перев'язувальний матеріал, білизну, багато інструментів, живильні середовища, розчини, інфекційний матеріал та ін.
Автоклав - металевий циліндр із міцними стінками, що герметично закривається, що складається з водопарової та стерилізуючої камер. Апарат забезпечений манометром, термометром та іншими приладами, що контролюють. В автоклаві створюється підвищений тиск, що призводить до підвищення температури кипіння води. Так, за 0,5 атм температура кипіння дорівнює 80 °С, при 1 атм - 100 °С, при 2 атм - 121 °С і при 3 атм - 136 °С.
Внаслідок того, крім високої температури, на мікроорганізми діє пара, суперечки гинуть вже при 120 °С. Найбільш поширений режим роботи автоклаву - 2 атм, 121 ° С, 15-20 хв. Час стерилізації зменшується у разі підвищення атмосферного тиску, отже, і температури кипіння. Мікроорганізми гинуть за кілька секунд, але матеріал обробляють протягом більшого часу, так як, по-перше, висока температура повинна бути і всередині матеріалу, що стерилізується, і, по-друге, існує так зване поле безпеки, розраховане на можливе відхилення від заданих параметрів при роботи автоклаву.
організм, зростання, стерилізація, фермент
Стерилізація представлена фізичним, хімічним, механічним та біологічним методами та різними способами. Доцільність застосування того чи іншого методу стерилізації та його способів залежить від особливості матеріалу, що підлягає стерилізації, його фізичних та хімічних властивостей. Тривалість стерилізації залежить від стерилізованого об'єкта, стерилізуючого агента та його дози, температури та вологості навколишнього середовища.
Фізичний метод стерилізації До способів фізичного методу стерилізації відносяться висушування, спалювання та прожарювання, кип'ятіння, пастеризація та тиндалізація, гаряче повітря (сухий жар), ультразвук, ультрафіолетове та радіоактивне випромінювання, струм високої частоти, сонячне світло. Найбільш поширеним способом стерилізації предметів, що допускають застосування високої температури, є стерилізація вогнем, гарячим повітрям та насиченою водяною парою під тиском. Вогонь використовують для спалювання інфікованих предметів, які не становлять будь-якої цінності (непотрібні папери, старі шпалери, ганчірки, сміття), для знезараження мокротиння хворих на туберкульоз, трупів людей і тварин, які загинули від особливо небезпечних інфекцій, а також для випалювання та прожарювання різних предметів . Випалювання та прожарювання широко застосовується в мікробіологічній практиці для знезараження інструментів, лабораторного та аптечного посуду. Прожарювання в полум'ї пальника або фламбування - спосіб стерилізації, при якому відбувається повне знешкодження об'єкта, оскільки гинуть і вегетативні клітини, цисти та суперечки мікроорганізмів. Зазвичай прожарюванням стерилізують петлі, шпателі, піпетки, предметні та покривні скла, дрібні інструменти та інші заражені предмети, якщо їх не можна кип'ятити. Не рекомендується стерилізувати прожарюванням ножиці та скальпелі, тому що під впливом вогню ріжуча поверхня стає тупою. Одним із найпростіших і найпоширеніших способів фізичного методу стерилізації, що застосовуються в медичній практиці, є стерилізація гарячим повітрям (сухим жаром). Сухожарова стерилізація здійснюється у сушильних шафах (печах Пастера). Сухе гаряче повітря має бактерицидну, вірусоцідну, спороцидну дію і використовується в основному для стерилізації виробів зі скла (лабораторний посуд-кухлі Петрі, колби, піпетки, пробірки та ін.), а також виробів з металу, які можуть бути простерилізовані парою під тиском. Крім того, сухий жар використовується для стерилізації предметів з порцеляни та термостійких речовин (тальк, біла глина), а також мінеральних та рослинних олій, жирів, вазеліну, ланоліну, воску. Найбільш ефективним режимом для цього способу стерилізації, що забезпечує загибель вегетативних форм та суперечка, є температура 160 – 180 градусів протягом 15 хвилин. Не можна стерилізувати сухим жаром живильні серед, ізотонічний розчин, предмети з гуми та синтетичних матеріалів, оскільки рідини закипають та виливаються, а гума та синтетичні матеріали плавляться. Стерилізація насиченою парою під тиском – це найбільш надійний і найчастіше приміряний спосіб стерилізації перев'язувального матеріалу, води, деяких лікарських засобів, поживних середовищ, м'якого інвентарю, інструментів, а також для знезараження відпрацьованого зараженого матеріалу. У хірургічній практиці перев'язувальний матеріал, халати хірургів, білизну для знезаражування, що оперується, за допомогою пари в автоклавах. Стерилізація парою під тиском здійснюється у спеціальних апаратах – автоклавах. При автоклавуванні відбувається повне знищення всіх мікроорганізмів та суперечка. Метод стерилізації парою під тиском заснований на нагріванні матеріалу насиченою водяною парою під тиском вище атмосферного. Спільна дія високої температури та пари забезпечують особливу ефективність даного способу. У цьому гинуть і вегетативні клітини, і суперечки мікроорганізмів. Суперечки мікробів під впливом насиченої водяної пари гинуть протягом 10 хвилин, а вегетативні форми - від 1 до 4 хвилин. Висока бактерицидна сила насиченої пари обумовлена тим, що під впливом водяної пари під тиском білки мікробної клітини набухають і згортаються, внаслідок чого мікробні клітини гинуть. Бактерицидна дія насиченої водяної пари посилюється при надмірному тиску. Стерилізацію в автоклаві проводять за різних режимів. Так, прості живильні середовища (м'ясо – пептонний агар та м'ясо – пептонний бульйон) стерилізують 20 хвилин при 120 градусах (1 атм.). Але при цьому режимі не можна стерилізувати середовища, що містять білки, вуглеводи та інші речовини, що легко змінюються від нагрівання. Середовища з вуглеводами стерилізують в автоклаві за 0,5 атм. 10 – 15 хвилин або дробово текучим паром. За допомогою високої температури можна знищити найстійкіші форми патогенних мікроорганізмів (включаючи і спороутворюючі) не тільки на поверхні об'єктів, що знезаражуються, але і глибині їх. У цьому полягає велика перевага високої температури, як надійного засобу стерилізації. Однак, деякі предмети псуються під дією високої температури і в цих випадках доводиться вдаватися до інших способів та засобів знезараження. Повне знешкодження матеріалів і предметів, що не допускають застосування стерилізації високою температурою, досягається шляхом повторної стерилізації водяною парою в апараті Коха при температурі не вище 100 градусів. Цей спосіб називається дробової стерилізації. Він зводиться до того, що спорові форми мікробів, що залишаються неубитими, через добу в термостаті при 37 градусах проростають у вегетативні клітини, загибель яких настає при подальшій стерилізації даного об'єкта текучим паром. Обробку парою проводять три рази по 30 - 40 хвилин. Одноразове прогрівання матеріалу при температурі нижче 100 градусів відоме під назвою пастеризації. Пастеризація запропонована Пастером і призначена переважно знищення переважно безспорових мікроорганізмів. Пастеризацію проводять при 60-70 градусах від 15 до 30 хвилин, при 80 градусах від 10 до 15 хвилин. У мікробіологічній практиці пастеризацією посівного матеріалу часто користуються виділення чистих культур спорообразующих мікроорганізмів і виявлення здатності мікроорганізмів до освіти спор. Для рідин, що втрачають смакові та інші цінні якості при дії високої температури (молоко, ягідні та фруктові соки, пиво, живильні середовища, що містять вуглеводи або сечовину та ін) стерилізацію текучим паром проводять при 50 – 60 градусах протягом 15 – 33333330 хвилин при 70-80 градусах протягом 5-10 хвилин. При цьому гинуть мікроби середньої резистентності, а стійкіші та суперечки зберігаються. Дробна 5 - 6 кратна стерилізація при 60 градусах протягом 1 години зветься тиндалізації. Багато виробів медичного призначення, виготовлені з полімерних матеріалів, не витримують стерилізації паровим способом за загальноприйнятими режимами. Для багатьох виробів через особливості, що містяться в них рідин (консервант, лікарські та інші засоби) неможливо стерилізувати загальноприйнятими способами і методами. Для таких виробів розробляються індивідуальні режими стерилізації, що забезпечують надійне забезпечення об'єктів. Так, стерилізація ротора для поділу крові на фракції проводиться водяною парою при температурі 120 градусів протягом 45 хвилин. Стерильність контейнерів для консервантів досягається за 110 градусів протягом 60 хвилин. Кип'ятіння – спосіб стерилізації, що застосовується для забезпечування шприців багаторазового користування, хірургічних інструментів, гумових трубок, скляного та металевого посуду. Стерилізацію кип'ятінням проводять у стерилізаторах. Спорові форми в окропі гинуть через 20 - 30 хвилин. Кип'ятіння протягом 45 хвилин широко використовують для знезараження виділень та інших інфекційних матеріалів, білизни, посуду, іграшок, предметів догляду за хворими. Гарячу воду (60 – 100 градусів) з миючими засобами використовують при пранні та прибиранні для механічного видалення забруднень та мікроорганізмів. Більшість вегетативних клітин гинуть за 70 градусів через 30 хвилин. Стерилізація фільтруванням застосовується в тих випадках, коли субстрати не витримують нагрівання, зокрема для середовищ, що містять білки, для сироваток, деяких антибіотиків, вітамінів, летких речовин. Цей прийом досить широко застосовується для стерилізації культуральної рідини, коли необхідно звільнити її від клітин мікроорганізмів, але зберегти всі продукти обміну, що містяться в ній, в незміненому вигляді. Спосіб полягає у фільтруванні рідин через спеціальні фільтри, що мають дрібнопористі перегородки і тому затримують клітини мікроорганізмів. Найбільш широко використовуються два типи фільтрів: мембранні фільтри та фільтри Зейтца. Мембранні фільтри готують із колодію, ацетату, целюлози та інших матеріалів. Фільтри Зейтца виготовлені із суміші азбесту з целюлозою. Крім того, для стерилізації застосовуються фільтри, виготовлені з каоліну з домішкою кварцового піску, з інфузорної землі та інших матеріалів («свічки» Шамберлана, Беркфельда). Мембранні та азбестові фільтри розраховані на одноразове використання. При ультрафіолетовому опроміненні бактерицидний ефект забезпечують промені завдовжки 200 – 450 нм, джерелом яких є бактерицидні лампи. За допомогою бактерицидних ламп виробляють стерилізацію ультрафіолетовими променями повітря в лікувально – профілактичних установах, боксах мікробіологічних лабораторій, на підприємствах харчової промисловості, у боксах з виробництва вакцин та сироваток, в операційних, маніпуляційних, дитячих закладах та ін Ультрафіо викликати загибель як вегетативних клітин, а й їх суперечка. Сонячне світло викликає загибель мікроорганізмів внаслідок дії ультрафіолетового опромінення та висушування. Висушування за допомогою сонячного світла згубно діє на багато видів мікроорганізмів, але його дія поверхнева і тому в стерилізаційній практиці сонячне світло відіграє допоміжну роль. Останнім часом при лікуванні ран та опіків використовують у вигляді гелів покриття із синтетичних та природних полімерів. Для місцевого лікування ран та опіків широко застосовують полімерні антисептичні плівки. До їх складу входять такі антимікробні засоби широкого спектру дії, як катапол, діоксидин, синій йод, а також сорбіт, що містить глутаровий альдегід. Для стерилізації цих плівок застосовується іонізуюче випромінювання у дозі 20,0 кГр. При промисловому випуску полімерних антисептичних плівок та сорбенту стерильність їх за такого режиму стерилізації забезпечується повністю. Радіоактивне випромінювання вбиває всі види мікроорганізмів як у вегетативної, і у спорової формі. Воно широко застосовується для стерилізації на підприємствах, що випускають стерильну продукцію та стерильні вироби медичного призначення одноразового користування, для дезінфекції стічних вод та сировини тваринного походження.
Механічний метод стерилізації Механічні способи стерилізації дозволяють видалити мікроби з поверхні предметів. До них відносяться обмивання, витрушування, підмітання, вологе протирання, провітрювання, вентиляція, обробка пилососом, прання.
Хімічний метод стерилізації У медичній практиці нині дедалі ширше застосування знаходять пластмаси. Вони використовують у стоматології, в щелепно – лицьової хірургії, в травматології, ортопедії, хірургії. Більшість пластмас не витримують теплових способів стерилізації парою під тиском та сухим жаром (сухим нагрітим повітрям). Застосовувані для стерилізації таких об'єктів розчини спирту, діоциду, потрійного розчину не забезпечують стерильності виробів, що обробляються. Тому для стерилізації виробів із пластмас використовують газовий та радіаційний методи, а також розчини хімічних препаратів. Впровадження в практику лікувальних закладів великої кількості виробів із термолабільних матеріалів сприяє впровадженню радіаційного, газового способів знезараження та стерилізації розчинами дезінфікуючих засобів. При хімічній стерилізації використовують гази та засоби з різних хімічних груп (перекисні, фенольні, галоїдовмісні, альдегіди, луги та кислоти, поверхнево – активні речовини та ін.). Для використання в побуті випускаються миючі, чистячі, відбілюючі та інші препарати, що надають антимікробну дію за рахунок введення до їх складу різних хімічних речовин. Ці препарати використовуються для очищення та знезараження санітарно – технічного обладнання, посуду, білизни та ін. .). Перед стерилізацією парами формальдегіду виробу необхідно піддати передстерилізаційному очищенню та ретельно просушити. При стерилізації будь-яким хімічним способом регламент обробки того чи іншого об'єкта залежить від особливостей знезаражуваного об'єкта, резистентності мікробів, особливостей властивостей хімічного препарату, температури навколишнього середовища, вологості та інших факторів. Так, стерильність металевих інструментів досягається за п'ять годин витримування у герметичній камері з парофомом при температурі не нижче 20 градусів та відносній вологості 95 – 98%, при температурі 15 градусів повна стерильність цих об'єктів досягається лише через 16 годин. Спороцидна активність глутарового альдегіду залежить від температури. Оптимум його настає при температурі 15 – 25 градусів. При підвищенні температури активність спороцидної дії препарату знижується. Стерилізацію хімічним методом застосовують дещо обмежено. Найчастіше цей метод використовують для попередження бактеріального забруднення поживних середовищ та імунобіологічних препаратів (вакцин та сироваток). До живильних середовищ найчастіше додають такі речовини, як хлороформ, толуол, ефір. При необхідності звільнити середовище від цих консервантів її нагрівають на водяній бані за 56 градусів і консерванти випаровуються. Для консервації вакцин чи сироваток використовують мертіолат, борну кислоту, формалін.
Біологічний метод стерилізації Біологічна стерилізація ґрунтується на застосуванні антибіотиків. Цей метод широко використовується для культивування вірусів.
Вплив температури на мікроорганізми.
Температура – важливий чинник, що впливає життєдіяльність мікроорганізмів. Для мікроорганізмів розрізняють мінімальну, оптимальну та максимальну температуру. Оптимальна- Температура, при якій відбувається найбільш інтенсивне розмноження мікробів. Мінімальна– температура, нижче за яку мікроорганізми не виявляють життєдіяльності. Максимальна- Температура, вище якої настає загибель мікроорганізмів.
По відношенню до температури розрізняють 3 групи мікроорганізмів:
2. Мезофіли.Оптимум - 30-37°С. Мінімум – 15-20°С.Максимум – 43-45°С.Мешкають в організмі теплокровних тварин. До них відносяться більшість патогенних та умовно-патогенних мікроорганізмів.
3. Термофіли.Оптимум - 50-60°С.Мінімум - 45°С.Максимум - 75°С. Мешкають у гарячих джерелах, беруть участь у процесах самонагрівання гною, зерна. Вони не здатні розмножуватись в організмі теплокровних тварин, тому не мають медичного значення.
Сприятлива діяоптимальної температури використовується при вирощуванні мікроорганізмів з метою лабораторної діагностики, приготування вакцин та інших препаратів
Гальмуюча дія низьких температур використовується при зберіганні продуктів та культур мікроорганізмів в умовах холодильника. Низька температура припиняє гнильні та бродильні процеси. Механізм дії низьких температур – загальмовування у клітині процесів метаболізму та перехід у стан анабіозу.
Згубна діявисокої температури (вища за максимальну) використовується при стерилізації . Механізмдії – денатурація білка (ферментів), ушкодження рибосом, порушення осмотичного бар'єру. Найбільш чутливі до дії високої температури психрофіли та мезофіли. Особливу стійкістьвиявляють суперечкибактерій.
Дія променистої енергії та ультразвуку на мікроорганізми.
Розрізняють неіонізуюче (ультрафіолетові та інфрачервоні променісонячного світла) та іонізуюче випромінювання (g-промені та електрони високих енергій).
Іонізуюче випромінювання має потужну проникаючу дію і пошкоджує клітинний геном. Механізмушкоджуючої дії: іонізація макромолекул, що супроводжується розвитком мутацій чи загибеллю клітини. При цьому летальні дози для мікроорганізмів вищі, ніж для тварин та рослин.
Механізмушкоджуючої дії УФ-променів: утворення димерів тиміну в молекулі ДНК , що припиняє поділ клітин і є основною причиною їх загибелі. Пошкоджуюча дія УФ-променів більшою мірою виражена для мікроорганізмів, ніж для тварин та рослин.
Ультразвук(звукові хвилі 20 тис. гц) має бактерицидну дію. Механізм: освіта у цитоплазмі клітини кавітаційних порожнин , які заповнюються парами рідини та в них виникає тиск до 10 тис. атм. Це призводить до утворення високореактивних гідроксильних радикалів, руйнування клітинних структур і деполімеризації органел, денатурації молекул.
Іонізуюче випромінювання, УФ-промені та ультразвук використовуються для стерилізації.
Висушування на мікроорганізми.
Вода потрібна для нормальної життєдіяльності мікроорганізмів. Зниження вологості середовища призводить до переходу клітин стан спокою, та був і загибелі. Механізмзгубної дії висушування: зневоднення цитоплазми та денатурація білків.
Більш чутливі до висушування патогенні мікроорганізми: збудники гонореї, менінгіту, черевного тифу, дизентерії, сифілісу та ін. Більш стійкі суперечки бактерій, найпростіші цисти, бактерії, захищені слизом мокротиння (туберкульозні палички).
У практицівисушування використовується для консервування м'яса, риби, овочів, фруктів, при заготівлі лікарських трав.
Висушування із замороженого стану під вакуумом – ліофілізація або ліофільна сушка.Її використовують для збереження культурмікроорганізмів, які у такому стані роками (10-20 років) не втрачають життєздатності та не змінюють властивостей. Мікроорганізми перебувають у стані анабіозу. Ліофілізація використовується у виробництві препаратівз живих мікроорганізмів: еубіотиків, фагів, живих вакцинпроти туберкульозу, чуми, туляремії, бруцельозу, грипу та ін.
Дія хімічних чинників мікроорганізми.
Хімічні речовини по-різному впливають мікроорганізми. Це залежить від природи, концентрації та часу дії хімічних речовин. Вони можуть стимулювати зростання(використовуються як джерела енергії), надавати мікробіцидне, мікробостатичне, мутагенна діяабо можуть бути байдужими для процесів життєдіяльності
Наприклад: 0,5-2% розчин глюкози - джерело живлення для мікробів, а 20-40% розчин має пригнічуючу дію.
Для мікроорганізмів необхідно оптимальне значення рН середовища. Для більшості симбіонтів та збудників захворювань людини – нейтральне, слаболужне або слабокисле середовище. При зростанні рН зрушується частіше у кислу сторону, зростання мікроорганізмів у своїй припиняється. А потім настає загибель. Механізм:денатурація ферментів гідроксильними іонами; порушення осмотичного бар'єру клітинної мембрани.
Хімічні речовини, які мають протимікробною дією, використовуються для дезінфекції, стерилізації та консервації.
Дія біологічних чинників мікроорганізми.
Біологічні фактори– це різні формивплив мікробів один на одного, а також вплив на мікроорганізми факторів імунітету (лізоцим, антитіла, інгібітори, фагоцитоз) під час їх перебування в макроорганізмі. Спільне існування різних організмів – симбіоз. Виділяють такі формисимбіозу.
Мутуалізм– така форма співжиття, коли обидва партнери отримують взаємну вигоду (наприклад, бульбочкові бактерії та бобові рослини).
Антагонізм– форма взаємовідносин, коли один організм завдає шкоди (аж до загибелі) іншому організму своїми продуктами метаболізму (кислоти, антибіотики, бактеріоцини) завдяки кращій пристосованості до умов середовища шляхом безпосереднього знищення (наприклад, нормальна мікрофлора кишечника та збудники кишкових інфекцій).
Метабіоз- Форма співжиття, коли один організм продовжує процес, викликаний іншим (використовує його продукти життєдіяльності), та звільняє середовище від цих продуктів. Тому створюються умови для подальшого розвитку (нітрифікуючі та аммоніфікуючі бактерії).
Сателізм– один із співмешканців стимулює зростання іншого (наприклад, дріжджі та сарцини виробляють речовини, що сприяють зростанню інших, більш вимогливих до поживних середовищ, бактерій).
Коменсалізм– один організм живе за рахунок іншого (завдає вигоди), не завдаючи йому шкоди (наприклад, кишкова паличка та організм людини).
Хижацтво- антагоністичні взаємини між організмами, коли один захоплює, поглинає та перетравлює інший (наприклад, кишкова амеба харчується кишковими бактеріями).
Стерилізація.
Стерилізація- Це процес повного знищення в об'єкті всіх життєздатних форм мікробів, у тому числі суперечка.
Розрізняють 3 групи методів стерилізації: фізичні, хімічні та фізико-хімічні.Фізичні методи:стерилізація високою температурою, УФ опроміненням, іонізуючим опроміненням, ультразвуком, фільтруванням через стерильні фільтри. Хімічні методи- Використання хімічних речовин, а також газова стерилізація. Фізико-хімічні методи- Спільне використання фізичних та хімічних методів. Наприклад, висока температура та антисептики.
Стерилізація високою температурою .
До цього методу належать: 1) стерилізація сухим жаром; 2) стерилізація парою під тиском; 3) стерилізація текучою парою; 4) тиндалізація та пастеризація; 5) прожарювання; 6) кип'ятіння.
Стерилізація сухим жаром.
Метод заснованийна бактерицидній дії нагрітого до 165-170 ° С повітря протягом 45 хв.
Апаратура: сухожарова шафа (піч Пастера). Пекти Пастера – металева шафаз подвійними стінками, обшитий зовні матеріалом, що погано проводить тепло (азбест). Нагріте повітря циркулює у просторі між стінками і виходить назовні через спеціальні отвори. При роботі потрібно суворо стежити за необхідною температурою і часом стерилізації. Якщо температура буде вищою, то відбудеться обвуглювання ватних пробок, паперу, в який загорнутий посуд, а при нижчій температурі потрібна триваліша стерилізації. Після закінчення стерилізації шафу відкривають тільки після її остигання, інакше скляний посуд може потріскатися через різку зміну температури.
а) скляні, металеві, фарфорові предмети, посуд, загорнуті в папір та закриті ватно-марлевими пробками для збереження стерильності (165-170°С, 45 хв);
б) термостійкі порошкоподібні лікарські засоби- тальк, біла глина, окис цинку (180-200 ° С, 30-60 хв);
в) мінеральні та рослинні олії, жири, ланолін, вазелін, віск (180-200 ° С, 20-40 хв).
Стерилізація парою під тиском.
Найбільш ефективний і широко застосовуваний у мікробіологічній та клінічній практиці метод.
Метод заснованийна гідролізуючу дію пари під тиском на білки мікробної клітини. Спільна дія високої температури та пари забезпечує високу ефективністьцієї стерилізації, коли він гинуть найстійкіші спорові бактерії.
Апаратура – автоклав.Автоклав складається з 2-х металевих циліндрів, вставлених один в одного з кришкою, що герметично закривається, гвинтами, що загвинчується. Зовнішній котел – водопарова камера, внутрішній – камера стерилізації. Є манометр, паровипускний кран, запобіжний клапан, водомірне скло. У верхній частині камери стерилізації – отвір, через який пара проходить з водопарової камери. Манометр служить визначення тиску в стерилізаційної камері. Між тиском і температурою існує певна залежність: 0,5 атм – 112°С, 1-01,1 атм – 119-121°С, 2 атм – 134°С. Запобіжний клапан для захисту від надмірного тиску. При підвищенні тиску вище заданого клапан відкривається і випускає зайву пару. Порядок роботи.В автоклав наливають воду, рівень якої контролюють за водомірним склом. У камеру стерилізації поміщають матеріал і щільно загвинчують кришку. Паровипускний кран відкритий. Включають нагрівання. Після закипання води кран закривають лише тоді, коли буде витіснене все повітря. пара йдебезперервним сильним сухим струменем). Якщо кран закрити раніше, показання манометра не відповідатиме потрібної температури. Після закриття крана в котлі поступово підвищується тиск. Початок стерилізації – той момент, коли стрілка манометра вказує заданий тиск. Після закінчення терміну стерилізації припиняють нагрівання та охолоджують автоклав до повернення стрілки манометра до 0. Якщо випустити пару раніше, рідина може скипіти через швидку зміну тиску і виштовхнути пробки (стерильність порушується). Коли стрілка манометра повернеться до 0, обережно відкривають паровипускний кран, спускають пару і потім виймають об'єкти, що стерилізуються. Якщо не випустити пару після повернення стрілки до 0, вода може конденсуватися і змочити пробки і матеріал, що стерилізується (стерильність порушиться).
Матеріал та режим стерилізації:
а) скляний, металевий, порцеляновий посуд, білизна, гумові та коркові пробки, Вироби з гуми, целюлози, деревини, перев'язувальний матеріал (вата, марля) (119 - 121 ° С, 20-40 хв));
б) фізіологічний розчин, розчини для ін'єкцій, очні краплі, дистильована вода, прості живильні середовища - МПБ, МПА (119-121 ° С, 20-40 хв);
в) мінеральні, рослинні олії у герметично закритих судинах (119-121°С, 120 хв);
Стерилізація текучою парою.
Метод заснованийна бактерицидній дії пари (100°С) щодо лише вегетативних клітин.
Апаратура– автоклав із незакрученою кришкою або апарат Коха.
Апарат Коха -це металевий циліндр із подвійним дном, простір у якому на 2/3 заповнено водою. У кришці – отвори для термометра та для виходу пари. Зовнішня стінка фанерована матеріалом, що погано проводить тепло (лінолеум, азбест). Початок стерилізації – час від закипання води та надходження пари до стерилізаційної камери.
Матеріал та режим стерилізації.Цим методом стерилізують матеріал, який не витримує температуру вище 100°С: живильні середовища з вітамінами, вуглеводами (середовища Гісса, Ендо, Плоскірєва, Левіна), желатином, молоко.
При 100°С суперечки не гинуть, тому стерилізацію проводять кілька разів. дробова стерилізація - 20-30 хв щодня протягом 3 днів.
У проміжках між стерилізаціями матеріал витримують за кімнатної температури для того, щоб проросли суперечки у вегетативні форми. Вони гинуть при наступному нагріванні при 100°С.
Тиндалізація та пастеризація.
Тиндалізація -метод дробової стерилізації за температури нижче 100°С. Вона використовується для стерилізації об'єктів, які не витримують 100°С: сироватка, асцитична рідина, вітаміни . Тиндалізація проводиться у водяній бані при 56 ° С по 1 годині 5-6 днів.
Пастеризація - часткова стерилізація (спори не гинуть), яка проводиться при відносно низькій температурі одноразово. Пастеризацію проводять при 70-80 ° С, 5-10 хв або при 50-60 ° С, 15-30 хв. Пастеризація використовується для об'єктів, що втрачають свої якості при високій температурі. використовують для деяких харчових продуктів: молока, вина, пива . При цьому не пошкоджується їхня товарна цінність, але суперечки залишаються життєздатними, тому ці продукти потрібно зберігати на холоді.
